摘要： 目的 观察不同浓度的氯化钴(CoCl2)对人肝癌细胞生长及及其诱导化学性缺氧的最佳浓度和时间。方法 通过不同浓度(0~800 μmol/L)CoCl2处理不同肝癌细胞系(HepG2 、Hep3B 、SMMC-7721 和 Bel-7402)24 h,利用CCK-8法检测四种人肝癌细胞株细胞存活率;选取100、200、300、400 μmol/L CoCl2作用不同肝癌细胞系0、12、24、48、72 h,利用CCK-8法检测四种人肝癌细胞株细胞存活率;确定最佳诱导浓度200 μmol/L后,分别于0、6、8、12、24 h应用Real-time PCR检测VEGF mRNA的转录;确定好最佳诱导时间,采用Western-blot方法检测评估100、200、300、400 μmol/L CoCl2作用不同肝癌细胞系24 h后表达HIF-1α蛋白情况。结果 CoCl2浓度在200 μmol/L以内对人肝癌细胞株的生长无明显的抑制作用,当浓度大于200 μmol/L、诱导时间大于24 h后明显抑制细胞生长,且抑制作用随着浓度的增加而增强(P<0.05)。200 μmol/L CoCl2刺激四种肝癌细胞0、6、8、12、24 h时VEGF mRNA转录递增。200 μmol/L CoCl2刺激细胞24 h时,能诱导并稳定维持四种肝癌细胞HIF-1α蛋白表达。结论 CoCl2诱导肝癌细胞化学性缺氧的最佳浓度为200 μmol/L,此时最佳时间为24 h。
