过表达Mertk的肝窦内皮细胞促进脂毒性肝细胞损伤的作用机制
高羽烜, 徐铭益, 王佳轶
2025, 30(6):
801-807.
摘要
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目的 探讨在脂毒性环境下,肝窦内皮细胞(liver sinusoidal endothelial cells,LSEC)中髓样上皮生殖酪氨酸激酶(myeloid-epithelial-reproductive tyrosine kinase,Mertk)的表达对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的影响及作用机制。方法 在人肝窦内皮细胞株(TMNK-1)中运用质粒转染的方法过表达Mertk(ov-Mertk)或敲减Mertk(sh-Mertk)。在上述质粒转染或未转染的LSEC中用棕榈酸(PA)处理以模拟高脂环境,共分为6组,分别为PA、BSA(高脂对照组)、ov-Mertk+PA、vector+PA(高脂Mertk过表达对照组)、sh-Mertk+PA、sh-NC+PA(高脂Mertk敲减对照组)。用Transwell将上述6组LSEC与人肝癌细胞株(HepG2)共培养。qPCR及蛋白质印迹检测LSEC对肝细胞脂质代谢、炎症反应和增殖相关因子的影响。EdU检测HepG2细胞的增殖活性。结果 当高脂或高脂Mertk过表达处理的LSEC与肝细胞共培养后,肝细胞中促进脂肪合成的脂肪酸合酶(fatty acid synthase,FAS)的基因表达增加,促进脂肪分解的过氧化物酶体增殖激活受体α(peroxisome proliferator activated receptor alpha, PPAR-α)的基因表达减少,而在高脂Mertk敲减时上述情况得到逆转(BSA比PA,FAS: 1.00±0.16比1.91±0.16, P=0.002,PPAR-α: 1.07±0.10比0.74±0.14, P=0.028;PA+vector比PA+ov-Mertk, FAS: 1.79±0.28比2.57±0.39, P=0.049,PPAR-α: 0.70±0.04比0.48±0.13, P=0.049;PA+sh-NC比PA+sh-Mertk,FAS: 1.93±0.29比1.37±0.16,P=0.045,PPAR-α: 0.70±0.12比0.95±0.06,P=0.035)。当高脂或高脂Mertk过表达处理的LSEC与肝细胞共培养后,肝细胞中促进炎症反应的IL-1β基因表达增加,而在高脂Mertk敲减时IL-1β的基因表达减少(BSA比PA,1.17±0.16比2.51±0.23,P=0.001;PA+vector比PA+ov-Mertk,2.37±0.15比3.81±0.33,P=0.002; PA+sh-NC比PA+sh-Mertk, 2.41±0.28比1.62±0.12, P=0.011)。当高脂或高脂Mertk过表达处理的LSEC与肝细胞共培养后,肝细胞中促进细胞增殖的细胞周期蛋白D1(CyclinD1)和增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)的基因表达增加,而在高脂Mertk敲减时CyclinD1和PCNA的基因表达下调(BSA比PA, PCNA: 1.02±0.03比1.55±0.27, P=0.026,CyclinD1: 1.13±0.13比1.47±0.09, P=0.019;PA+vector比PA+ov-Mertk, PCNA: 1.57±0.20比2.04±0.16, P=0.032,CyclinD1: 1.29±0.44比2.32±0.35, P=0.034;PA+sh-NC比PA+sh-Mertk, PCNA: 1.51±0.30比0.98±0.13, P=0.048,CyclinD1: 1.42±0.09比1.11±0.16, P=0.045)。EdU结果显示,肝细胞在与高脂或高脂Mertk过表达的LSEC共培养后,处于增殖状态的肝细胞数量增加,相反,在与高脂Mertk敲减的LSEC共培养后,处于增殖状态的肝细胞数量减少[BSA: (12.86 ± 3.38) %比PA: (49.15 ± 4.5) %, P=0.0004;PA+vector: (42.15 ± 8.43) %比PA+ov-Mertk: (65.41 ± 0.66) %, P=0.009;PA+sh-NC: (48.19 ± 3.11) %比PA+sh-Mertk: (28.44 ± 1.96) %, P=0.001]。结论 过表达Mertk的LSEC可以促进脂毒性肝细胞的脂肪合成、炎症反应和细胞增殖,起到促进NASH的作用。敲减LSEC中的Mertk可以作为NASH治疗的靶点。